¿Cuál es el mejor medio de cultivo para embriones de ratones en fase de dos células?

Especialistas Sztein

Jorge SzteinJorge Sztein es Médico Veterinario de la Universidad Nacional de La Plata y Doctor en Ciencias de la misma Universidad con especialidad en Animales de Laboratorio (1991). Luego de estar en la Academia Nacional de Medicina (1987-1989), comienza como post doctorando en 1990 en el NIH (Institutos Nacionales de la Salud de los EEUU) creando animales transgénicos realizando técnicas de criopreservacion. En 1995 lo contrata los laboratorios Jackson como jefe de investigación en criobiología y comienza a actuar como profesor en cursos del instituto, en USA, Italia, Francia y España. En el año 2000 vuelve al NEI-NIH como director del manejo de colonias y criopreservación y luego en el 2008 pasa a otro instituto (NIAID) como director de  criopreservación y reproducción asistida. Actualmente es consultor privado en temas relacionados a la criopreservación reproducción asistida.

Jorge nos ayudará o guiará en los siguientes temas:

  1. Congelacion de embriones, esperma y ovarios.
  2. Fertilización in vitro (FIV)

Todas las consultas que tengan deben enviarlas a bioterioscom@gmail.com e iremos agregando las preguntas y respuestas en esta sección.

Consulta 1:

Gostaria de saber qual o melhor meio de cultura para embriões de camundongos em fase de 2 células. Estou tentando cultivá-los até blastocisto para empregar a técnica de implantação no útero de fêmeas sincronizadas (pseudoprenhas). Pois estou tento dificuldades técnicas de fazer implante pelo infundíbulo. (En español: Me gustaría saber cuál el mejor medio de cultivo para embriones de ratones en fase de 2 células. Estoy intentando cultivarlos hasta blastocisto para emplear la técnica de implantación en el útero de hembras sincronizadas (pseudopreñadas). Pues estoy teniendo dificultades técnicas para hacer el implante por el infundíbulo).

Respuesta 1:

El mejor medio que puedes utilizar para el cultivo de los embriones es el KSOM/aa . Sin embargo si tu piensas cultivar el embrión de 2-células hasta blastocisto para luego utilizar la transferencia no quirúrgica (NSET) o directamente en útero perderás mucha eficiencia de sobrevida simplemente por el cultivo. Tendrás mucha mejor respuesta si colectas embriones en 8 células y los cultivas (2.5 dias) o morula tardía 3.5 días y los transfieres.
Me gustaría saber cuáles son tus difilcutades en la trasnferencia en infudíbulo, tal vez podamos ayudarte. (Em portugues: O melhor medeio do que podes utilizar para o cultivo dos embriões é o KSOM/aa . No entanto se teu pensas cultivar o embrião de 2-células até blastocisto para depois utilizar a transferência não cirúrgica (NSET) ou diretamente em útero perderás muita eficiência de sobrevida simplesmente pelo cultivo. Terás muita melhor resposta se coletas embriões em 8 células e os cultivas (2.5 dias) ou morula tardia 3.5 dias e os transferes. Me agradaria saber quais são teus difilcutades na trasnferencia em infudíbulo, talvez possamos ajudar-te).

Consulta 2:

Não haverá dificuldade de coletar os embriões de 8 células ou mórulas e então poderei implantar no outro dia pelo útero (cirurgia).
Todas as vezes que tentei implantar embriões pelo infundíbulo, a micropipeta sempre entope, mesmo absorvendo os fluidos com papel absorvente. E também acontece de não conseguir impor muita força pelo sopro, me parece que os embriões voltam e caem na cavidade. (En español: No habrá dificultad de recolectar los embriones de 8 células o mórulas y entonces podré implantar en otro día por el útero (cirugía).Todas las veces que intenté implantar embriones por el infundíbulo, la micropipeta siempre se obstruye, aún absorbiendo los fluidos con papel absorbente. Y también me sucede que no consigo imponer mucha fuerza cuando soplo, me parece que los embriones vuelven y se caen en la cavidad.).

Respuesta 2:

Si la pipeta se tapa porque hay mucha sangre, trata de usar una gota de epinefrina antes de romper la bursa. Las pipetas, idealmente, deben tener la punta pulida a la llama de un mechero (cuidado porque ¡se puede cerrar!), pero tambien es importante que al cargar la pipeta, la última gota de medio no deje aire en la punta. Otra opción que tu tienes es transferirlos en la ampula (en lugar del infundibulum) haciendo un pequeño agujero con una aguja 30G. (Em portugues: Se a pipeta se tampa porque há muito sangue, trata de usar uma gota de epinefrina antes de romper a bursa. As pipetas, idealmente, devem ter a ponta polida à chama de um isqueiro (cuidado porque ¡se pode fechar!), mas tambien é importante que ao carregar a pipeta, a última gota de meio não deixe ar na ponta. Outra opção que tua tens é transferí-los na ampula (em lugar do infundibulum) fazendo um pequeno buraco com uma agulha 30G.).

Comentarios

  • Cleide Silva: 13 Aug 2013

    Muito obrigada pelas dicas. Vou tentar transferir pela ampula.
    Grande abraço
    Cleide


  • Rumualdo Gonzalez: 27 Oct 2013

    Estimado Dr Jorge estoy interesado en conocer la formulacion del medio BARC para ser utilizado en el cultivo vitro de embriones bovinos. Gracias


Seguiremos ofreciendo un espacio para todos aquellos que quieran participar y colaborar en esta cruzada educativa, porque tenemos muy claro que estaremos constantemente: “Aprendiendo de los Animales de Laboratorio”.

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